Содержание Список сокращение
Введение
Глава 1. Обзор литературы 1.1 Системы транспорта калия в митохондриях 1.1.1 Транспорт калия в митохондрии
1.1.2 Молекулярные структуры, ответственные за транспорт калия в МХ
1.1.3 Физиологическое значение транспорта калия в МХ
1.1.4 АТФ-ингибируемые калий-транспортирующие каналы
1.2 АТФ-зависимый калиевый канал цитоплазматической мембраны
1.2.1 Структурная организация цитоплазматического АТФ-зависимого калиевого канала
1.3 АТФ-чувствительный калиевый канал внутренней мембраны МХ
1.3.1 Структурная организация митоКАТФ канала
Глава 2. Модуляторы
2.1 Модуляторы митоКАТФ канала
2.1.1 Метаболические модуляторы митоКАТФ канала
2.2 Функциональная роль митоКАТФ
2.2.1 Активация митоКАТФ в развитии устойчивости организма к гипоксии
2.2.2 Механизмы защиты сердца при гипоксии, опосредованные активацией митоКАТФ
2.2.3 Феномен прерывистой гипобарической тренировки
2.3 Выделение МХ
2.3.1 Выделение МХ печени крысы
2.3.2 Выделение МХ сердца крысы
2.3.2 Выделение и очистка митоКАТФ канала
Глава 3. Изучение энергозависимого входа К+ в МХ методом спектрофотометрии
3.1 Изучение ДНФ-индуцированного выхода ионов калия из МХ
3.2 Получение и очистка антител к белку с молекулярной массой 55 кДа.
3.2.1 Подготовка белка с м.м. 55 кДа: выделение и очистка
3.3 Иммунизация и анализ препарата антител
3.3.1 Детекция специфических антител и определение титра
3.3.2 Вестерн-Блот анализ
3.4 Исследование ДНФ-индуцированного выхода К+ из митохондрий с помощью К+-селективного электрода
3.5 Реконструкция белка в БЛМ
3.6 Иммунноэлектронная микроскопия
3.7 MS-MALDI-TOF/TOF- анализ
3.8 Очистка антител к АТФ-зависимому белку с м.м. 55 кДа
3.9 Очистка антител к АТФ-зависимому белку с м.м. 55 кДа на колонке с иммобилизованным Белком А
3.10 Ингибиторный анализ с использованием антител к белку с м.м. 55 кДа
Глава 4. Выделение комплекса цитоплазматических мембран и микросом печени крыс
4.1 Метод отбора высоко- и низкоустойчивых животных
Глава 5. Результаты и обсуждения
5.1 Параметры функционирования митоКАТФ канала у крыс с различной резистентностью, а также у животных, адаптированных к гипоксии
5.1.1 Изучение параметров дыхания и окислительного фосфорилирования в МХ печени и сердца крыс с различной резистентностью к гипоксии
5.1.2 Изучение параметров АТФ-зависимого транспорта К+ в МХ печени сердца крыс с различной резистентностью к гипоксии
5.1.2 Изучение параметров АТФ-зависимого транспорта К+ в МХ печени сердца крыс с различной резистентностью к гипоксии
5.2 Изучение структурной организации митохондриального АТФ-зависимого калиевого канала
5.2.1 Определение гомологии белка с м.м. 55 кДа методом MS-MALDI-TOF/TOF
5.3 Ингибиторный анализ активности митоКАТФ канала с использованием антител, полученных на белок с м.м. 55 кДа 5.3.1 Определение степени чистоты белка, используемого для иммунизации 5.4 Иммунизация и определение титра полученных антител 5.4.1 Определение специфичности полученных антител 5.4.2 Выделение иммуноглобулинов G (IgG) из антисыворотки и проведение ингибиторного анализа 5.5 Электронная микроскопия МитоКАТФ канала ЗАКЛЮЧЕНИЕ ВЫВОДЫ
ЛИТЕРАТУРА
СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ МитоКАТФ – митохондриальный АТФ-чувствительный калиевый канал
ЦитоКАТФ – цитоплазматический АТФ-чувствительный калиевый канал
5-ГД – 5-гидроксидекановая кислота
Глиб – глибенкламид
АТФ – аденозин-5’-трифосфат
УТФ – уридин-5’-трифосфат
УДФ – уридин-5’-дифосфат
УМФ – уридин-5’-монофосфат
ГТФ – гуанин-5’-трифосфат
МХ – митохондрии
АТ – антитела
ФН – неорганический фосфат
АФК – активные формы кислорода
KIR – inward rectifying K+ channels (канальная субъединица митоКАТФ канала)
SUR – sulphonyl urea receptor (регуляторная субъединица митоКАТФ канала,
чувствительная к сульфонилмочевинам)
PCO’s – potassium channel openers (активаторы калиевых каналов)
NFBs – nucleotide phosphate binding domains (нуклеотидсвязывающие участки)
БЛМ – бислойные липидные мембраны
ФИА - феномен ишемической адаптации
ГТ – гипоксическая тренировка
НУ – крысы, низкоустойчивые к гипоксии
ВУ – крысы, высокоусточивые к гипоксии
Введение Митохондриальный АТФ-ингибируемый калиевый канал (митоКАТФ), осуществляющий вход калия в МХ, был обнаружен методом пэтч-кламп во внутренней мембране МХ в 1991 г. ............
