Конструкции хроматографических колонок и аппаратура для жидкостной хроматографии низкого давления
Хроматографические колонки низкого давления
Конструкция колонок
Под низким давлением подразумевается, что давление, обеспечивающее протекание рабочей жидкости через колонку не превышает 4-х атмосфер.
Слева изображена колонка для препаративного варианта хроматографии. Такие колонки готовятся из обычного молибденового стекла толщиной около 1 мм. Они могут достигать 8 см в диаметре и 1,5 м в высоту. Сверху колонка снабжена стандартным шлифом (№ 29), куда вставляется шлифованная пробка с капельницей. После заполнения колонки рабочим составом пробку устанавливают на место, смазав предварительно верхнюю половину ее шлифа силиконовой смазкой, но так, чтобы она не попала внутрь колонки. Затем, слегка прижимая, пробку поворачивают. Если шлиф хорошо притерт, слой смазки должен стать прозрачным. Герметичность посадки пробки следует проверять перед каждым опытом. При неработающем насосе (он подает жидкость сверху) и освобожденном зажиме, стоящем на резиновой трубке выхода из колонки, жидкость из нее вытекать не должна. Кстати, установка стеклянного крана вместо простого зажима на выходе из колонки нецелесообразна ввиду опасности попадания смазки крана в канал жидкости. В нижнюю часть колонки заплавлен стеклянный фильтр, изготовленный спеканием стеклянного порошка.
На рис. 1 справа изображена аналитическая колонка малого диаметра (-5 мм) с напаянной на нее рубашкой для протекания термостатирующей колонку воды. Пробка-шлиф (№ 14), стеклянный фильтр и зажим на выходе колонки такие же, как у препаративного варианта.
Целый ряд фирм выпускают готовые колонки низкого давления — как правило, разборные. Уплотнения на обоих концах в них осуществляется при помощи резиновых прокладок.
Рабочие гранулы
Содержимое хроматографических колонок любого типа всегда представлено некими сферическими «гранулами» малого размера (20-30), изготовленными из пористого материала, плотно и равномерно упакованными (в окружении жидкости) по всему объему колонки. Химический состав гранул и окружающей рабочей жидкости определяют тип хроматографии. Далее мы рассмотрим важнейшие из этих типов подробно. Сейчас же, чтобы к этому более не возвращаться, коснемся некоторых моментов, связанных с подготовкой колонок низкого давления для любого типа хроматографии в лабораторных условиях.
Во-первых, сами гранулы, если они поставляются в сухом виде, необходимо перед употреблением промыть, дать им набухнуть, а затем освободить от мелких обломков и пыли, которые, вследствие истирания при транспортировке, неизбежно засоряют фирменные препараты. Этот «мусор» забивается в пространства между гранулами в колонке и мешает свободному протеканию рабочей жидкости. Удаление мелких частиц осуществляют с помощью операции «отмучивания». Разбавленную суспензию набухших, промытых и переведенных в нужный буфер гранул заливают доверху в мерный цилиндр, объем которого в 5—6 раз больше, чем объем осевших влажных гранул. Они собираются в течение нескольких минут в нижней части цилиндра. Как только между осевшими гранулами и мутной жидкостью над ними обозначается резкая граница, эту жидкость отсасывают и выбрасывают. ............
