Курсовая работа

на тему:

"Группа пневмовирусов"

Содержание

1. Уникальные особенности пневмовирусов

1.1 Общее введение

1.2 Номенклатура

1.3 Выделение вируса

1.4 Хранение вируса

2. Основные методы

2.1 Культивирование респираторно-синцитиального вируса

2.1.1 Чувствительные культуры клеток

2.1.2 Цитопатогенное действие

2.1.3 Методы повышения инфекционное ™

2.1.4 Методы стабилизации инфекционное

2.2 Методы определения инфекционности

2.3 Гемагглютинация

2.4 Гемадсорбция

2.5 Иммунофлуоресцентные методы

2.6 Твердофазный иммуноферментный анализ

3. Аналитические методы

3.1 Радиоактивное лечение, радиоиммуноанализ и радиоиммунопреципитация

3.1.1 Введение радиоактивной метки в вирусные белки в зараженных РСВ клетках

3.1.2 Радиоиммуноанализ

3.1.3 Радиоиммунопреципитация

3.2 Метод выявления дефектных интерферирующих частиц

3.3 Электронная микроскопия

3.3.1 Морфология вирионов

3.3.2 Морфогенез вирионов

3.3.3 Сканирующая электронная микроскопия

3.3.4 Локализация и количественное определение вирусных антигенов по связыванию стафилококков

3.4 Концентрирование вируса

3.5 Очистка и радиоактивное мечение РСВ

3.5.1 Градиентное центрифугирование

3.5.2 Очистка РСВ методом изопикнического центрифугирования

3.6 Радиоактивное мечение вирионной РНК

3.7 Анализ вирусных РНК и белков методом электрофореза в полиакриламидном геле

3.7.1 Анализ белков

3.7.2 Анализ РНК

3.8 Очистка матричной РНК для трансляции

3.9 Молекулярное клонирование и олигонуклеотидное секвенирование

3.10 Очистка вирусных белков

3.10.1 Вирусные полипептиды

3.10.2 Очистка капсидного белка

3.10.3 Очистка вирионных гликопротеинов

4. Специальные биологические методы

4.1 Получение моноклональных антител

4.2 Выделение температурно-чувствительных мутантов

4.3 Получение персистентно инфицированных клеточных культур

1. Уникальные особенности пневмовирусов 1.1 Общее введение

В состав группы пневмовирусов входят респираторно-синцитиальный вирус человека, респираторно-синцитиальный вирус крупного рогатого скота и вирус пневмонии мышей. Прототип этой группы, респираторно-синцитиальный вирус, - это плеоморфный оболочечный вирус, геном которого представлен несегментированной РНК негативной полярности. РСВ принадлежит роду Pneumovirus, который вместе с родами Paramyxovirus и Morbillivirus образует семейство Paramyxoviridae. Однозначно доказана этиологическая роль РСВ при ежегодных вспышках респираторных заболеваний у детей. Уникальность биологических, биохимических и клинических характеристик этого вируса не позволяет объединить его с представителями рода Paramyxovirus. РСВ обнаруживают у сельскохозяйственных животных; РСВ крупного рогатого скота вызывает у животных респираторное заболевание. Антитела к РСВ часто присутствуют и в сыворотке крови других домашних и лабораторных животных, контактирующих с человеком, но выделение вируса от этих животных не описано. Изоляты РСВ, выделенные от человека и крупного рогатого скота, имеют антигенное родство; среди человеческих изолятов не обнаружена связь между антигенной вариабельностью и клиникой заболеваний. Вирус пневмонии мышей, вызывающий у этих животных респираторное заболевание, не имеет антигенного родства с РСВ, однако в некоторой степени сходен с ним; во всяком случае это единственный вирус, достаточно близкий к РСВ, чтобы быть включенным в род Pneumovirus. ............