Методики анализа витаминов
Витамин А
(Мол. вес 299,22)
Являясь сильно ненасыщенным соединением, витамин А легко реагирует с кислородом воздуха и окисляющими агентами.
Наличие в молекуле спиртовой группы обусловливает реакции с хлорангидридами кислот с образованием производных — бензоат, ацетат и др. в-нафтойнокислый эфир представляет кристаллическое вещество, также обладающее витаминным действием.
Качественные реакции
1. Максимум абсорбции при 328 нм.
2. В хлороформном растворе с треххлористой сурьмой появляется синее окрашивание.
Количественное определение
Реакция с треххлористой сурьмой используется и для количественного определения. Синюю окраску сравнивают со стандартной шкалой так называемых синих единиц.
5—10 г драже экстрагируют хлороформом для извлечения витамина А, хлороформ отгоняют. Остаток омыляют 0,5 н. раствором спиртового раствора едкого кали в продолжение ½ часа. После этого из смеси извлекают неомыляемую фракцию серным эфиром 3—4 порциями (по 50—100 мл), соединенные эфирные вытяжки промывают водой, высушивают безводным сульфатом натрия, растворитель нацело удаляют выпариванием в токе углекислоты, остаток растворяют в хлороформе, чтобы в 1 мл раствора содержалось от 10 до 40 ИЕ витамина А.
К 0,2 мл хлороформного раствора добавляют 1 каплю уксусного ангидрида и 2 мл хлороформного раствора треххлористой сурьмы. Появляющуюся синюю окраску немедленно сравнивают с подходящей по цветности пробиркой стандартной шкалы или в ступенчатом фотометре, фотоколориметре и т. д.
При визуальном способе определения наиболее точные результаты получаются, если окраска по интенсивности укладывается в пределах 4—10-й пробирок.
Для приготовления шкалы пробирок-эталонов 75 г химически чистого сульфата меди и 3,5 г химически чистого нитрата кобальта растворяют в 500 мл воды. Полученный раствор разбавляют водой, как указано ниже.
Реакция витамина А с треххлористой сурьмой протекает быстро, достигая максимума приблизительно через 10 секунд; при низких температурах (0—1°) окраска более устойчива; яркий (дневной или искусственный) свет заметно влияет на быстроту выцветаемости.
Витамин В1 (Тиамин-бромид бромистоводородный)
(Мол. вес 435,2)
1. Качественные реакции. При прибавлении к подкисленному разведенной азотной кислотой 1%-ному раствору нескольких капель раствора нитрата серебра выпадает творожистый осадок, не растворимый в азотной кислоте.
2. Тиохромная проба основана на переводе тиамина красной кровяной солью в щелочной среде в тиохром, растворимый в бутиловом или изоамиловом спирте с синей флуоресценцией:
К 5 мл раствора тиамина (с содержанием 0,01 мг) в делительной воронке добавляют 5 мл 1%-ного раствора красной кровяной соли, перемешивают и оставляют стоять в течение 2 минут. Затем добавляют 20 мл изобутилового спирта и сильно перемешивают, встряхивая в течение 1 минуты, отделяют спиртовый слой и фильтруют. Тиохром, полученный в результате окисления тиамина, обусловливает синюю флуоресценцию.
3. Тиамин дает осадки с некоторыми общими алкалоидными реактивами, например с реактивом Драгендорфа (пикриновая кислота не дает осадка).
Количественное определение
1. После нейтрализации (по бромтимоловому синему) тиамин-бромид определяется аргентометрически.
2. Другой метод основан на свойстве витамина В1 образовывать с диазотированным пара-амино-ацетофеноном соединение фиолетово-красного цвета, которое нерастворимо в воде, со многими органическими растворителями образует цветные растворы, допускающие сравнение с эталонными растворами. Из органических растворителей применяют обычно ксилол или толуол.
Для определения тиамина, растворенного в однородном бесцветном растворителе, нет необходимости извлекать цветное соединение из раствора. ............
