Флуоресцентный иммуноанализ с полным внутренним отражением
ВВЕДЕНИЕ
Иммуноанализ оказывает большое влияние иа медицинские исследования и клиническую практику с момента его появления в начале шестидесятых годов. Антитела использовали как реагенты для разработки высокочувствительных и специфических методов анализа, которые позволяют определять клинически важные вещества в сложных биологических пробах. Позднее выявились по меньшей мере два главных направления в развитии иммунологических методов анализа. Одно направление с чисто научной основой преследовало цель достижения максимальной теоретически возможной чувствительности. Важнейшим результатом этого иаправления можно считать разработку высокочувствительного иммуноанализа для определения в сыворотке тироидстимулирующего гормона, что в свою очередь впервые позволило дифференцировать больных гипертироидизмом, имеющих очень низкий уровень TSH, и здоровых людей. Для достижения этой цели были опробованы различные методы, которые можно подразделить на несколько групп в соответствий с основными принципами анализа; как правило, в них использовались меченые реагенты. При разработке этих анализов применялись
1) высокоэффективные системы разделения для минимизации уровня фоновых сигналов;
2) новые метки с высокой удельной активностью; 3) приборы с широким рабочим диапазоном, например люминометры или флуо-риметры с временным разрешением.
Эти системы успешно применены для определения уровня TSH в сыворотке, что позволило надежно дифференцировать состояния эутироидизма и гипертироидизма.
Второе общее направление в развитии иммуноанализа касается стадии разделения. Здесь основная цель заключается в создании таких систем анализа, в которых нет необходимости в отделении свободного определяемого вещества от связанного с антителами до измерения сигнала. Наборы для нескольких таких так называемых гомогенных, или безразделительных, методов анализа производятся в промышленном маштабе. Они получили широкое распространение благодаря простоте выполнения анализов и возможности применения в клинической практике. Движущей силой этих разработок были не столько научные интересы, сколько стремление сделать иммуноанализ технически' менее сложным и пригодным для изучения одной или нескольких проб. Другой целью разработки этих наборов является обеспечение возможности выполнения иммуноанализов в децентрализованных пунктах, например в поликлиниках, медпунктах и независимых ~ специализированных больницах. Наличие широкого рынка сбыта стимулировало разработку гомогенных методов анализа. Из них наибольшую известность приобрели системы для анализа в растворах, в которых связывание антител с антигенами приводит к появлению сигнала. Примером может служить метод поляризационного флуоресцентного иммуноанализа, впервые предложенный Дандли-кером и др., и соответствующий набор реагентов, выпускаемый в промышленном масштабе фирмой Abbott Laboratories под торговым названием TDx™. Другим примером является методика им-муноферментного анализа типа EMIT™, созданная фирмой Syva Corporation и основанная на пространственном ингибировании фермента, индуцированном связыванием антителами меченного ферментом антигена.
В других жидкофазных методах используются липосомы, содержащие генератор сигнала. ............
